PCR总是有杂带怎么消除

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解决时间 2021-02-06 08:19

提问者网友：寂寞梧桐
2021-02-05 19:47

PCR总是有杂带怎么消除

最佳答案

五星知识达人网友：由着我着迷
2021-02-05 20:03

可以小幅提高退火温度，大概1-2度，这样可以增加引物结合的准确性。如果没有用，建议用BLAST检查一下引物的序列是否在基因组内其他位置有相似序列。
如果杂带无论如何也无法消除建议重新设计引物，或者使用切胶的方法提纯追问提高退火温度，条带出的少了，但是仍有杂带。肯定是引物不特异吗？我直接用的外文文献里的引物。追答你所扩增的基因以及采用的物种都和外文文献里的一模一样吗？如果不是，建议重新检查一下你所要扩增的 locus 以及你所采用的物种的基因组。
其实有时候杂带的出现真的很难解释，我以前那个project就出现过用尽方法也除不掉的神秘杂带。这种情况下切胶纯化是一种比较有效的方法~~~。如果纯化后产物浓度过低可以稀释一下后用纯化过的产物作为模板，再来一轮PCR, 有时可以有效去杂带追问是的，根据本实验室除了时间稍稍不同及酶的用量不同，其他都一样。追答那就切胶纯化吧~，如果杂带亮度明显低于主带亮度，那纯化再稀释一下，用产物作模板再来一轮PCR是比较有可能成功的。
或者重新设计下引物。追问非常感谢！！！追答嗯，据说Hot-start PCR 对消杂带也有效果，可以一试

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