您好，请问你一个PCR引物的问题，我从NCBI数据库中找到我需要的基因序列了

可是上面给出的序列是从ATG开始的，一直到终止密码子，我其上游序列没有，我基因的下游序列似乎也没有，此时我该如何设计引物啊？该菌种给出了全基因组，但是我查了，给的只是一片段一片段的基因，并不是全部连起来的，基因下游和上游序列都没给。。
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你把他的右上角的序列范围放宽就好了啊

你好！ 如果要克隆的话，这个序列足够你设计引物了。上游引物从ATG开始，而下游引物则从终止密码先前。用软件设计的时候，要选中所有序列（从ATG到终止密码）作为扩增对象。哪怕中间序列有没有（可以用N代替），以及基因以外的序列对你来说没有关系的。 如果对你有帮助，望采纳。

看上去你要扩全基因，那从cDNA文库去钓就好了，如果只知道某段序列，就用RACE，有现成的试剂盒。如果是已知基因，也许别人早就做好了，那去文献里搜索引物就更方便了。

菌种的基因啊。那就不考虑跨内含子的问题了。直接在基因内部设计也是可以的，只需要比对同菌种内其他非目的基因有无冲突就可以了。没有冲突就先合成引物试一试，电泳没有多余条带就应该没有问题。