如何用电脑软件绘制质粒图谱?
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解决时间 2021-03-29 16:55
- 提问者网友:疯孩纸
- 2021-03-28 19:44
如何用电脑软件绘制质粒图谱?
最佳答案
- 五星知识达人网友:青尢
- 2021-03-28 21:20
一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori,即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因:可以便于加以检测,如Amp+ ,Kan+ 多l 克隆位点:MCS 克隆携带外源基因片段 P/E:启动子/增强子 Terms:终止信号 加poly(A)信号:可以起到稳定mRNA 作用 。
二、如何阅读质粒图谱
第一步:首先看Ori 的位置,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) Ori 的箭头指复制方向,其他元件标注的箭头多指转录方向(正向)。
第二步:再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记:
(1)Ampr:水解β -内酰胺环,解除氨苄的毒性。
(2)tetr :可以阻止四环素进入细胞。
(3)camr:生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性。
(4)neor(kanr):氨基糖苷磷酸转移酶,使G418(卡那霉素衍生物)失活。
(5)hygr:使潮霉素β 失活。
第三步:看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点,便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源 DNA 插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb 的外源DNA 片段。
二、如何阅读质粒图谱
第一步:首先看Ori 的位置,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) Ori 的箭头指复制方向,其他元件标注的箭头多指转录方向(正向)。
第二步:再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记:
(1)Ampr:水解β -内酰胺环,解除氨苄的毒性。
(2)tetr :可以阻止四环素进入细胞。
(3)camr:生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性。
(4)neor(kanr):氨基糖苷磷酸转移酶,使G418(卡那霉素衍生物)失活。
(5)hygr:使潮霉素β 失活。
第三步:看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点,便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源 DNA 插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb 的外源DNA 片段。
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