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为什么目的基因要先转移到DH5a,再到BL21

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解决时间 2021-02-15 11:23
为什么目的基因要先转移到DH5a,再到BL21
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为什么目的基因要先转移到DH5a,再到BL21
DH5a和BL21都可以作为表达宿主。
BL21 是蛋白酶缺陷株,表达出来的蛋白不会被降解,做蛋白表达是比较适合用的,。
BL21生长要比DH5a快,这是他们的又一区别,在高密度发酵BL21表达蛋白时,需要控制它的表达条件,使得高密度且高表达。
DH5a复制稳定的特点,所以它是核酸疫苗通常使用的宿主株。
DH5a中表达时外源基因的启动子必须被大肠杆菌的RNA POLYMERASE 识别,比较好用的载体有PLPR可诱导的启动子。而带有T7 启动子的载体则不能在其中表达,因为识别T7 启动子的T7 RNA POLYMERASE 在DH5a中没有。
对于BL21,已将T7 RNA POLYMERASE 的编码基因整合到了菌的基因组上,能识别T7 启动子,从而可容纳外源基因在此T7启动子的带动下表达。
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不同的大肠杆菌感受态有各自的特点,比如dh5α适合克隆,bl21适合表达,所以会把目的基因转移到dh5α里,在确定克隆、构建载体没有问题之后,再转到表达菌株bl21,反之则不行。为什么?就如每个人在一个体系里有各自的特长和分工一样。
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