同样的样本用QPCR能扩增，但是巢氏PCR却扩增不出来，为什么？

同样的样本用QPCR能扩增，但是巢氏PCR却扩增不出来，为什么？

巢氏PCR是先扩增大片段，再扩增小片段，通常只有在防止非特异扩增的时候会采用这种办法。而qPCR一般只扩增小片段。
你说的巢氏PCR没有做出来，是指大片段就没做出来，还是大片段做出来，小片段没结果呢？
如果大片段就没做出来，可能要考虑引物特异性，或者反应条件和扩增效率的问题。
如果只是小片段没扩出来，可能就需要看看大片段扩增出来的是不是目标片段，如果扩增出来的大片段本身就不含有小片段，就没办法扩增出来。
所以如果片段不相关，光是样本相同是无法找到原因的。追问我前几个月用同样样本抽提得到的DNA，却可以用巢氏p出来，现在却整不出来了，觉得不应该是样本的问题。追答问题就在于是几个月前的样本，因为在保存过程中可能会出现降解或者其他问题。如果目标基因那段刚好降解完了，或者量变少了，都会影响结果的。所以如果确保其他东西都没问题，就换下模板试试。