真核过表达质粒,原核过表达质粒的区别~急求~~
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解决时间 2021-03-27 22:25
- 提问者网友:贪了杯
- 2021-03-26 22:04
真核过表达质粒,原核过表达质粒的区别~急求~~
最佳答案
- 五星知识达人网友:怀裏藏嬌
- 2021-03-26 23:12
所有的质粒都是在细菌(原核)中构建和扩增的,但要在真核细胞中表达需要真核表达载体,要在原核细胞中表达需要原核表达载体。这两种载体主要的区别是启动子和polyA加尾信号的不同,一个适合在原核细胞中表达,一个适合在真核细胞中表达。
你需要哪种质粒取决于你最终需要在哪种细胞中表达目的蛋白,如果你要直接在大肠杆菌中表达目的蛋白,然后用纯化的蛋白去处理黑色素瘤细胞,那你就应该用原核载体;如果你要在大肠杆菌中构建质粒,然后把质粒转染到哺乳细胞中表达目的蛋白,你就应该用真核载体。但无论哪种载体,构建和扩增质粒都是在大肠杆菌中进行的。
至于抗性基因,因为所有质粒都要在大肠杆菌中扩增,所以都带有大肠杆菌的某种耐药基因。至于真核耐药基因则不一定,原核表达载体肯定不需要真核耐药基因,真核表达载体则有些有真核耐药基因,有些没有。另外,原核细胞的kana耐药基因和真核细胞的neo耐药基因是同一个基因。
你需要哪种质粒取决于你最终需要在哪种细胞中表达目的蛋白,如果你要直接在大肠杆菌中表达目的蛋白,然后用纯化的蛋白去处理黑色素瘤细胞,那你就应该用原核载体;如果你要在大肠杆菌中构建质粒,然后把质粒转染到哺乳细胞中表达目的蛋白,你就应该用真核载体。但无论哪种载体,构建和扩增质粒都是在大肠杆菌中进行的。
至于抗性基因,因为所有质粒都要在大肠杆菌中扩增,所以都带有大肠杆菌的某种耐药基因。至于真核耐药基因则不一定,原核表达载体肯定不需要真核耐药基因,真核表达载体则有些有真核耐药基因,有些没有。另外,原核细胞的kana耐药基因和真核细胞的neo耐药基因是同一个基因。
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- 1楼网友:深街酒徒
- 2021-03-27 00:29
质粒只是小型环状DNA分子,你指的真核、原核具体是什么?追问比如我要构建过表达质粒载体,质粒带的抗性有些是原核,有的是真核,不懂。。
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