请教有经验前辈，EMSA实验所需溶液的配方

请教有经验前辈，EMSA实验所需溶液的配方

1. 避免缓冲液高浓度电供体基团比:NH4甘氨酸精氨酸Tris等等;
2. 各种缓冲液能强螯合剂EDTAEGTA等等;
3. 各种缓冲液能高浓度强原剂比DTT防止二价Ni原; 4. 能含离型垢剂比SDS防止Ni流失;
-1mMPMSF防止目5. 破碎细胞候建议加入蛋白酶抑制剂比0.1
蛋白降解;
6. 缓冲液加入甘油防止蛋白间由于疏水相互作用发聚集沉淀甘油浓度高达50%(v/v)
7. 应避免含碳酸氢钠柠檬酸等物质;
8. 缓冲液NaCl浓度应300mM2M间;
9. 加入变性剂促溶盐酸胍(高6M)尿素(高8M) 10.加入非离型垢剂TritonTweenNP40等高2%减少背景蛋白污染除核酸污染
组氨酸标签蛋白纯化
没有意义
建议自己下去查查资料

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:nh4，甘氨酸，精氨酸，tris，等等; 2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如edta，egta，等等; 3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如dtt，防止二价ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如sds，防止ni流失; -1mm的pmsf，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1 蛋白被降解; 6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v) 7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质; 8. 缓冲液里nacl的浓度应在300mm到2m之间; 9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6m)，尿素(最高可8m) 10.可加入非离子型去垢剂，如triton，tween，np40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染 组氨酸标签蛋白的纯化 感觉这样的提问没有意义 建议自己下去查查资料