PCR产物电泳严重拖带

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解决时间 2021-02-19 04:10

提问者网友：美人性情
2021-02-18 08:23

以连接产物纯化后为模板进行PCR，电泳从电泳孔严重拖带，同样的体系和条件，之前都能扩增出来，现在要不然就是出现地毯式拖带，要么样品就积聚在点样孔跑不动，请问这两者是什么原因，谢谢实验大神。

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五星知识达人网友：七十二街
2021-02-18 09:13

有可能是你的胶点样孔不整齐，就是你做胶的时候胶没有凝固好，你可以试试重新做块胶。
PCR拖带产生原因有很多，不知道楼主属于哪一种：
1、退火温度较低，可以提高2到3度
2、Mg离子浓度一般的PCR在1.5mM就可以了，不知楼主用的多少
3、模板浓度较高或者含有其他PCR抑制剂，建议稀释下模板
4、延伸时间一般1kb/min，时间太短可能会延伸不完全
5、循环数太高也可能引起拖带，考虑平台期，30－35循环应该足够了

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1楼网友：酒者煙囻
2021-02-18 09:22

电泳检测是为了确定pcr产物是否扩增出来，是否有非特异性扩增和引物二聚体。点样时，产物与buffer混合带负电，通过电泳可以将长度不同的片段分开，以达到检测的目的

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