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microrna干扰,与传统rnai相比有何优势

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解决时间 2021-11-16 01:33
microrna干扰,与传统rnai相比有何优势
最佳答案
基因和microrna有多个结合位点
合生基因构建的miRNA sponge抑制载体,经特异地优化设计,增强吸附能力的同时增加了更多的结合位点,这样提高了成熟miRNA或siRNA抑制能力,消弱细胞中miRNA或siRNA导致的基因沉默效应,从而进行miRNA或siRNA功能缺失性研究。
最近进行课题设计,想验证一下microRNA和预测的靶基因是否结合。同时在靶基因3‘-UTR区的SNP是否影响它们的关系。这个SNP位点在种子区,推测也具有一定功能。第一步想克隆microRNA到表达载体,同时克隆3’-UTR区(包括野生型和突变型)到PGL-3 control 荧光素酶基因下游,双转细胞后,利用荧光素酶报告系统检测两者是否结合,snp位点是否影响结合。
请问具体的实验设计:
    选取什么细胞系进行实验,是靶基因和miRNA内源表达高的,还是低的。细胞系的基因型是否影响实验结果?
    2.我选用的载体是否合适,miRNA如果已有慢病毒的表达载体(商品),是否可以直接利用,还是需要重新做?PGL-3 control是否可以?有无合适的位点供克隆,只发现XbaI。内对照用PGL-TK,因为不是很熟悉这套载体,不知选的是否合适。
    3.如果验证成功,还需什么实验佐证,后续的功能研究如何进行?是否也需要用RNAi的方法抑制靶基因表达,再转入野生型和突变性两种基因,看效果?

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