研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂——内皮抑素,它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法,请分析回答下列问题。
(1)从肝细胞中分离出相应的RNA,经 获得内皮抑素基因,再经 进行扩增,以获得更多的目的基因。
(2)扩增的目的基因与pUC18质粒(如图所示)都用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ进行双酶切,然后用DNA连接酶进行连接,构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体 连接,还减少了目的基因与目的基因、载体与载体的连接,提高了重组质粒的比例。
(3)大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因,LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶,当培养基中含有IPTG和Xgal时,Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之,则形成白色菌落。选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外,还应加入的物质有 和氨苄青霉素。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成 颜色的菌落,原因是 。
(4)从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养,获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板,37 ℃培养。将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中,72 h后在显微镜下观察细胞存活情况并统计(或记录)活的内皮细胞数目,实验结果如下表所示。
粗提表达产物浓度/(μg·mL-1)
0
2
4
6
8
10
活的内皮细胞数目(×102)
12
6
2
1
0.5
0.5
实验结果说明
。反转录(或逆转录) (聚合酶链式反应)(2)反向(任意)(3)IPTG、X-gal 白 重组质粒的LacZ基因中插入了目的基因,使LacZ基因不能表达出β-半乳糖苷酶(4)
研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂——内皮抑素,它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法,请分析回答下列问题。(1)从肝细胞中分离出相应的RNA,经获得
答案:2 悬赏:80 手机版
解决时间 2021-02-20 02:06
- 提问者网友:感性作祟
- 2021-02-19 13:22
最佳答案
- 五星知识达人网友:舍身薄凉客
- 2021-02-19 14:05
(答案→)反转录(或逆转录) (聚合酶链式反应)(2)反向(任意)(3)IPTG、X-gal 白 重组质粒的LacZ基因中插入了目的基因,使LacZ基因不能表达出β-半乳糖苷酶(4) 解析:(1)从肝细胞中分离出相应的RNA,经反转录(或逆转录)获得内皮抑素基因,再利用PCR技术进行体外扩增,以获得更多的目的基因。(2)双酶切后,目的基因两端的黏性末端不同,被切开的运载体两端的黏性末端也不同,这样可以避免目的基因与载体反向连接,还能减少目的基因与目的基因、载体与载体的连接,提高了重组质粒的比例。(3)大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因,LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶,当培养基中含有IPTG和Xgal时,Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之,则形成白色菌落。选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外,还应加入的物质有IPTG、X-gal和氨苄青霉素。因为重组质粒的LacZ基因中插入了目的基因,使LacZ基因不能表达出β-半乳糖苷酶,所以成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成白色菌落。(4)由表中数据可知,粗提表达产物浓度越高,活的内皮细胞数目越少,说明重组内皮抑素(或粗提表达产物)能够抑制毛细血管内皮细胞的增殖。
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- 1楼网友:神的生死簿
- 2021-02-19 14:28
这个解释是对的
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