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【白细胞介素1】白细胞介素-1(IL-1)是重要的炎性介质之一也是一种...

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解决时间 2021-02-05 20:08
【白细胞介素1】白细胞介素-1(IL-1)是重要的炎性介质之一也是一种...
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【答案】 (1)根据题意:在pBV220载体(图A)多克隆位点的EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点之间插入目的基因IL1-His,构建表达载体pBV-IL1-His(图B),故为了防止目的基因和pBV220载体在酶切后的末端发生任意连接,导致自身环化,酶切时应选用的酶是EcoRⅠ和BamHⅠ;根据图示,为插入前的载体为3666bp,但插入目的基因之后的长度为4153bp,故目的基因的长度为4153-3666=487bp;构建基因表达载体时,必须包含目的基因、标记基因(氨苄青霉素抗性基因)、启动子、终止子等结构.(2)将目的基因导入细菌等微生物的方法是感受态细胞法,转化感受态大肠杆菌时需要用Ca2+处理细胞;利用PCR技术体外扩增DNA时,不需要加入解旋酶,原理是DNA的热变性,将双链DNA加热到90℃以上,目的是使双链DNA变性,解聚为单链.(3)基因工程的最后一步是目的基因的检测与鉴定,检测目的基因是否表达成相应的蛋白质,方法是抗原-抗体杂交技术;假设未检测出目的蛋白则目的基因表达不成功,原因可能是目的基因在受体细胞中没有表达.故答案为:(1)EcoRⅠ和BamHⅠ487 启动子、终止子(2)Ca2+使双链DNA变性,解聚为单链(3)抗原-抗体杂交 目的基因在受体细胞中没有表达
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