pcr产物没有纯化能够直接进行双酶切吗

pcr产物没有纯化能够直接进行双酶切吗

不可以。
首先，采用的是质粒模板；
其次，扩增得到的非单一条带，如果不纯化直接酶切，那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段，继续试验的话，菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。

第三、PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液，会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开，即便是隔夜酶切也不可以。

我暂时保留我的看法！

PCR产物经PCR纯化试剂盒纯化后，可以做EcoRI和BamHI的双酶切。酶切、纯化都可以用PCR纯化试剂盒完成，只有一种情况例外，PCR模板为质粒，且这个质粒和要用的载体有相同的抗性。此时需要跑一次胶来丢掉模板质粒，否则在连接产物转化的平板上长出的菌落许多是模板质粒，而不是你所构建的质粒。
PCR产物不经纯化也可以直接酶切，但也很麻烦，效果可能不会很好，可能需要添加其他东西（亚精胺，限制性内切酶缓冲液，BSA等）来完成酶切。

PCR产物经PCR纯化试剂盒纯化后，可以做EcoRI和BamHI的双酶切。酶切、纯化都可以用PCR纯化试剂盒完成，只有一种情况例外，PCR模板为质粒，且这个质粒和要用的载体有相同的抗性。此时需要跑一次胶来丢掉模板质粒，否则在连接产物转化的平板上长出的菌落许多是模板质粒，而不是你所构建的质粒。
PCR产物不经纯化也可以直接酶切，但也很麻烦，效果可能不会很好，可能需要添加其他东西（亚精胺，限制性内切酶缓冲液，BSA等）来完成酶切。