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有关漆酶基因在毕赤酵母中的表达可以发哪个sci期刊

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解决时间 2021-03-22 14:16
有关漆酶基因在毕赤酵母中的表达可以发哪个sci期刊
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只知道有个微生物前沿的普刊,sci 的不太了解
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有关漆酶基因在毕赤酵母中的表达可以发哪个sci期刊
(1)图中质粒含有SnaB、AvrⅡ、BglⅡ和SacI限制酶切割位点,其中SacI位于启动子上,BglⅡ位于终止子上.如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,只能用限制酶SnaB和AvrⅡ切割质粒,所以应在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaB、AvrⅡ限制酶识别序列.这两种酶切割产生的黏性末端不同,这样可以避免质粒和目的基因自身环化,还可以防止目的基因和质粒反向连接.
(2)获取目的基因后,需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒,并将其导入大肠杆菌以获取大量重组质粒.
(3)步骤3是要获取含有5′AOX1--3′AOX1段基因,应选用限制酶BglⅡ来切割重组质粒获得重组DNA,然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞.
(4)5′AOX1--3′AOX1段基因含有卡那霉素抗性基因,则导入重组质粒的大肠杆菌能抗卡那霉素,所以为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功,在培养基中应该加入卡那霉素以便筛选.转化后的细胞中是否含有HBsAg基因,可以用DNA分子杂交方法进行检测.
(5)巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌,能将甲醇作为其唯一碳源,同时甲醇能诱导AOX1基因表达.所以转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后,需要向其中加入甲醇以维持其生活,同时诱导HBsAg基因表达.
(6)细菌是原核生物,只含核糖体一种细胞器,而酵母菌是真核生物,除含有核糖体外,还含有内质网、高尔基体等细胞器.所以与细菌相比,用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞,其优点是在蛋白质合成后,细胞可以对其进行加工(修饰)并分泌到细胞外,便于提取.
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