琼脂糖凝胶电泳跑成这样是怎么回事

琼脂糖凝胶电泳跑成这样是怎么回事

电泳出现拖尾现象,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑：
1、PCR产物自身原因：
往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.
对策：①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量 ,减少循环次数,提高退火温度.
2、电泳体系的问题：
（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.（2）上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.（3）电压太高.（4）适当把你的胶的浓度加大.（根据你的片断大小而定）（5）观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.

根据我多年的经验，少年，你的胶背景亮说明你的uv开得太亮了，正常时候不需要这么强光就能看到条带。 从你胶的样子可以看出，你跑胶的时间太长了，看样子你用的是sybr green，这种染料在你电泳的时候是会向条带相反方向移动的，跑时间太长，造成你的胶这样下面一部分已经看不到marker和背景亮光了。而过长时间跑胶造成的温度升高（拿在手里热乎乎的软软的，听起来像便便。。。），使胶中的样品和染料很多都扩散出去了，造成你的maker和条带整个的不够亮。 从你marker的位置可可以看出你跑胶的时间很长，因为最大的条带的位置比较低了。 即使你的背景这么强，也可以看出在你样品孔的下方很近的地方有条带，我不知道你样品的大小和来源，但是可以给出以下几个可能原因： 1. 你的loading buffer不正确，造成样品条带异常移动 2. 最可能原因是你的样品中dna就那么大。如果你是提取质粒的话，你做错某步，把细菌的核dna提取出来了，所以才那么大。你做错的可能是裂解那步，裂解时间超过5分钟了或者你剧烈混合裂解液和细菌了，只有invert就可以了。 3. 你上样量也要保证，测一下浓度，一般200ng的条带就非常亮了。 跑胶时候，电压一般80-120，可以低，也可以高到200，但是室温下推荐80-100。时长20-60分钟为宜，一般推荐30分钟，不过你可以跑一段时间拿出来uv照一下，这时候你可以看到条带，如果分得不够开，再放回去跑一会就好了。如果实在需要长时间跑，放4度跑。