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(10分)mtDNA是存在于人类细胞线粒体中双链闭合环状的DNA分子,具有自我复制、转录和控制合成蛋白质的功能。mtDNA的类型具有明显的种族特异性。现用两种限制性核酸内切酶M和N

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解决时间 2021-02-10 07:42
(10分)mtDNA是存在于人类细胞线粒体中双链闭合环状的DNA分子,具有自我复制、转录和控制合成蛋白质的功能。mtDNA的类型具有明显的种族特异性。现用两种限制性核酸内切酶M和N切割某人的mtDNA(限制酶M和N的识别序列和切割位点如图1所示),然后通过凝胶电泳分离DNA片段(通电状态下,不同分子量的DNA片段在琼脂中的移动距离不同从而被分离),分析后得到下表。
凝胶电泳结果(1kb=1000对碱基)
(数字表示该片段的存在以及数量)
分子量(kb)
酶M
酶N
酶M+酶N
1.0
1

1
2.0


1
3.0


1
4.0


1
5.0
1


6.0


1
7.0

1

9.0

1

10.0
1



(1)该mtDNA的长度为 kb。在该DNA分子中,M酶与N酶的切割位点分别有 个。
(2)M酶与N酶切出的能相互粘连的末端能在 酶的作用下相互连接,请将连接的结果表示出来: 。连接后的序列是否可以用M酶、N酶进行切割,请简述理由: 。
(3)图2为真核细胞的某基因的结构图以及限制酶M和N的切割位点。现用酶切法直接从供体细胞中切割图2中的基因从而获得目的基因,可选用酶 来切割。这个方法虽然操作方便,但切割下的基因中含有不能指导蛋白质合成的区域。因此,目前往往采用逆转录的人工合成的方法,其基本步骤是: 。

图2
(4)已知图2中Ⅱ区的碱基数是2000个,其中阴影区域碱基数是800个,空白区域中G 和C的总数共有400个,则由该区转录的mRNA中A和U总数是 。16kb; 3、2
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