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ch1L基因是蓝藻拟核DNA上与叶绿素合成有关的基因。为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞。构建过程如下:第①步:用PCR技术从蓝藻环状DN

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解决时间 2021-02-17 13:27
ch1L基因是蓝藻拟核DNA上与叶绿素合成有关的基因。为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞。构建过程如下:

第①步:用PCR技术从蓝藻环状DNA中扩增出ch1L基因片段。
第②步:将ch1L基因与质粒构建形成重组质粒1。
第③步:将重组质粒1中ch1L基因中部0.8kb片段删除,用一段红霉素抗性基因取代之,得到重组质粒2。
第④步:将重组质粒2导入蓝藻细胞,由于改造后的基因与ch1L基因仍有很长的序列相同,所以能准确地与其发生同源重组,产生出缺失ch1L基因的突变株。请根据上述资料,回答下列问题:
(1)第①步用PCR技术扩增DNA片段时用到的耐高温的酶通常是指什么酶? 。
PCR扩增DNA时必须加入引物,其作用是 。
(2)利用PCR技术扩增DNA一般要经过三十多次循环,每次循环都要经过三个步骤,其中“复性”这一步骤发生的变化是 。
(3)构建重组质粒1、2时,为保证成功率,往往使用 酶对基因和质粒进行切割,以切出相同的黏性末端,便于连接。此酶的作用是将DNA分子的 键打开。
(4)质粒是基因工程中最常用的运载体,其化学本质是 ,此外还可用噬菌体、动植物病毒作用为运载体。
(5)导入重组质粒2以后,往往还需要进行检测和筛选,可用 制成探针,检测是否导入了重组基因,在培养基中加入 可将变异株细胞筛选出来。TaqDNA聚合酶 与模板结合,使DNA聚合酶从引物3’端延伸DNA链
最佳答案
(答案→)TaqDNA聚合酶 与模板结合,使DNA聚合酶从引物3’端延伸DNA链 解析:(1)PCR中DNA聚合酶具有耐高温的能力,称为TaqDNA聚合酶;引物一般为一小段单链DNA或RNA,与模板结合,使DNA聚合酶从引物3’端延伸DNA链。(2)PCR分三步:第一是变性,主要是DNA双链解开,第二是退火,也称复性,主要是引物与DNA单链结合,第三是延伸,主要是新的DNA单链延伸。(3)注意用同一种限制性内切酶,才能切出相同的黏性末端,从而才能相连;限制性内切酶破坏的是磷酸二酯键。(4)质粒是存在于细菌拟核外能够自主复制呈环状的很小的DNA分子。(5)因为重组质粒中含有红霉素抗性基因,所以可用红霉素抗性基因制成探针,让探针与重组质粒中含有红霉素抗性基因发生杂交。在含有红霉素的培养基中,如果细菌仍能生存,说明导入了重组基因。
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