荧光定量pcrct值每次重复相差多少

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解决时间 2021-02-11 03:41

提问者网友：暮烟疏雨之际
2021-02-10 09:19

荧光定量pcrct值每次重复相差多少

最佳答案

五星知识达人网友：孤独的牧羊人
2021-02-10 09:33

如果有标准曲线，按照标准曲线计算。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20，内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说。。

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1楼网友：有你哪都是故乡
2021-02-10 10:49

看了你空间里的溶解曲线，你可以看到溶解峰的温度都很低，全在80以下，你扩出来的东西多半只是引物，你跑定量的时候有做ntc的孔吗，如果有做，可以对照ntc组和加了模板的组，溶解峰还是一样的话，那你扩出来的产物100%是引物了。再有，你的扩增曲线问题，ct太了，一般做定量认为ct=25时，是一个模板扩出来的，所以当大于25扩出来的结果都不可信。还有，你反转录的时候rna加多少，2微克？，反转录体系是多少,20微升？反转录之后按照多少比例稀释，1比4？总之，问题可以再问详细一点，也可以直接hi我如果做过ntc那溶解峰就没问题了，而且都很单一，特异性蛮好的。没稀释的cdna做的定量，ct大于30？你p的什么基因呢，表达量也太低了吧，内参的ct呢，也是这么低吗

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