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PDA培养基的配制方法是什么?

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解决时间 2021-01-18 06:23
PDA培养基的配制方法是什么?
最佳答案
PDA培养基的配方土豆 200g
葡萄糖 20g
琼脂 15~20g
水 1000mL
pH值 自然
PDA培养基的配制称量和熬煮  按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。
加热溶解  把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
分装  按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
加棉塞  培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
包扎  加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
棉塞制作说明棉塞的作用:一是防止杂菌污染;二是可过滤空气,保证通气良好,并可减缓培养基水分的蒸发,所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。
正确的棉塞是形状、大小,松紧应与试管口(或三角烧瓶)完全适合。过紧则妨碍空气流通,操作不便;过松时,空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中,达不到灭菌的目的。棉塞过小往往易掉进试管内,因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。正确的棉塞头较大,加塞时,应使棉塞长度的1/3留在试管口外,2/3在试管口内。目前,有条件的实训室已使用坚固的塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞,制作棉塞要选纤维较长的棉花,一般不选用脱脂棉。因为它容易吸水变湿,造成污染,而且价格也贵。
PDA培养基配制注意事项培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。
PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。
培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.2g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性。
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