我是荧光定量pcr初学者，现在想做定量试验，最近做了个标准曲线，可是点都不在线上，内和目的基因都是

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解决时间 2021-01-25 06:35

提问者网友：两耳就是菩提
2021-01-24 14:46

我是荧光定量pcr初学者，现在想做定量试验，最近做了个标准曲线，可是点都不在线上，内和目的基因都是。作标曲的时候样品是按十倍，十倍稀释的。溶解曲线都只有一个峰，想请教各位大侠，这是什么情况

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五星知识达人网友：蓝房子
2021-01-24 15:53

一般来说，
Ct值在10-30之间是比较稳定的，最好在20-30之间，建议将样品稀释到此浓度
溶液一定要注意混匀，体系越小，重复性越差些，就越要注意
剩下就是加样的问题了，注意下体系中的气泡和枪头上的气泡什么的，RT-PCR是个技术活，好好练手，加油！
PS：溶解曲线的峰值一般要在70℃以上，具体看你设计的引物P出来的产物的Tm值大小，如果峰值过低，可能是引物二聚体。

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1楼网友：冷風如刀
2021-01-24 16:57

条件是没有经过优化的，可能因为是不是最近反应体系，另外也有可能是因为模版质量不好的关系先多看点资料

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