直接分离人中性粒细胞做实验效果好不好

直接分离人中性粒细胞做实验效果好不好

小鼠骨髓中性粒细胞的分离  
实验器材：器械（眼科小直剪2把，小弯镊3把），无菌塑料滴管，15ml离心管，4mlEP管，培养皿，1ml器，70um尼龙筛网，低温离心机 试剂：PBS（1×，10×），HBSS，percoll，percoll储存液（percoll:10×PBS=9:1），percoll溶液（45%，81%，62%，55%，50%，分别用1×PBS稀释Percoll储存液到相应浓度）Histopaque1119，小鼠中性粒细胞缓冲液（MNB，既含0.1%牛血清白蛋白，1%葡萄糖的HBSS溶液） 
材料：8-12周C57小鼠 实验步骤： 
1. 拉颈处死小鼠，分离其胫骨和股骨，用纱布将胫骨和股骨擦干净，置于75%酒精中浸泡5min 
2. 2.用小直剪剪掉骨髓两端，暴露骨髓腔，用MNB冲洗，每次1ml，胫骨冲洗两次，股骨冲洗3次。 
3. 3.冲洗液用70um尼龙筛网过滤，离心收集细胞，600g  4℃ 10min,低减速。 4.弃上清，用3ml45%percoll溶液重悬细胞 
4. 5.Percoll梯度准备：3ml81%，2ml62%，2ml55%，2ml50%percoll溶液 6.小心的将细胞悬液置于percoll梯度上，1600g,30min,10℃,无制动离心。 7.弃掉62%percoll层以上的溶液，收集62%-81%之间的percoll层。 
5. 8.10mlMNB洗两次，600g,10℃,10min,离心。弃上清，用3mlMNB重悬细胞。 
6. 9.将细胞悬液小心得置于3mlHistopaque1119上，1600g,10℃,30min,无制动离心，去除红细胞层。 
7. 10.收集1119和MNB之间的细胞层，10mlMNB 洗两次，600g, 4℃ 10min,低减速离心 11.按需要将细胞用培养基重悬到一定的浓度。

病情分析：,意见建议：这样的情况有最简单的方法，是不用人工检查的