在基因工程中，用双酶切目的基因和质粒时怎么保证目的基因和载体的定向连接？难道不会再出现其他连接吗？

在基因工程中，用双酶切目的基因和质粒时怎么保证目的基因和载体的定向连接？难道不会再出现其他连接吗？

不同的酶切获得黏性末端不同，不同的黏性末端不能相连，如果直插入一个片段那么插入片段的方向是确定的。

基因太小了。比对单酶切和双酶切的条带位置是否有偏差 可尝试提高质粒用量并调整胶的浓度到2%，还要注意电泳时间，不要跑过头了。

如果只以单酶切割。会使目地基因或质粒自我连接。形成环状结构。但用双酶的话就可以避免这个问题啦。

同一种酶切的末端可以相连接在一起，如果质粒的左端和目的基因的左端用同一种酶切，二者的右端用另一种相同的酶切，那么就可以实现定向连接了。