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生化试剂中乙醇沉淀DNA和异丙醇沉淀DNA的区别是什么?

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解决时间 2021-04-04 10:03
生化试剂中乙醇沉淀DNA和异丙醇沉淀DNA的区别是什么?
最佳答案
0.5-1倍体积的异丙醇可以选择性的沉淀dna和大分子rrna和mrna,但是对5srna,trna以及多糖等不产生沉淀。一般不需要等温放置很长时间,其缺点是易使盐类dna共沉淀,而且异丙醇难以挥发除去。必须用70%乙醇洗涤。
无水乙醇沉淀dna需要阳离子如na离子的存在,而且需要1/1o体积的naac,并且加2倍体积的无水乙醇,而且沉淀的盐少,易挥发除去。缺点是总体积较大。需在-20放置很长时间,30分钟-1小时。同样需要70%乙醇洗涤。
我个人认为无水乙醇沉淀dna的效果更好些,dna在体积较大的条件下可以沉淀的更充分,提取的dna含的盐离子也很好,而且乙醇也容易挥发去除,纯度相对来说也较好。
两者都适合沉淀线形和闭环的dna或质粒,因为两者化学性质都是醇类,沉淀原理是相似。
如果你的dna含量丰富的话,沉淀10min 就足够了,如果含量低,则需要在-20度沉淀30min-2小时。可以不短观察沉淀的量决定沉淀时间。
全部回答
异丙醇和酒精都是有机溶剂,一般来讲,提取质粒的时候一开始都要用异丙醇沉淀,因为异丙醇沉淀的效果要好一些,但最后大多用酒精沉淀,因为酒精容易挥发,对下游的实验影响小。索莱宝异丙醇比较疏水,能更好地沉淀核酸,用乙醇的目的是去盐,它比异丙醇更亲水,所以能去掉一些盐离子。 有时还用70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度。在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇,乙醇的极性要强于异丙醇,所以一般用2倍体积乙醇沉淀,但在多糖、蛋白含量高时,用异丙醇沉淀可部分克服这种污染,尤其用异丙醇在室温下沉淀对摆脱多糖、杂蛋白污染更为有效。异丙醇沉淀核酸时,高浓度盐存在将使大量多糖存在在溶液中,从而可达到去多糖的作用。但高浓度的盐存在会影响核酸的进一步操作,因此必须用乙醇多次洗涤脱盐。
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