连接转化成功后，用m13的引物做pcr，跑出好几条带是怎么回事

连接转化成功后，用m13的引物做pcr，跑出好几条带是怎么回事

这种现象我也出现过，我分析的可能是因为M13引物自身的特性，如果P长片段，很可能会非特异的与质粒基因组DNA结合或者与质粒结合而产生长度在2000bp左右的条带，会很难验证克隆是否成功。所以，建议用目的片段的特异引物进行PCR反应，或者直接送测序。

能否详细描述一下两条带的位置，另外你以什么作为template？cdna？ 因为一般情况下引物二聚体的条带都是或多或少的存在的。 如果是目的条带有两条，那么可能是引物出现了错配，也有可能是本身就有两种可能。回收测序即可。 追问： 两条带距离很近，一条很亮一条很暗，用的dna基因组 回答： 基因组dna的话有杂带几乎不可避免，因为错配可能很大，挺正常的。 如果两条带距离很近、又基本符合你目的片段的大小的话，可以继续跑胶让它们分开一些，然后切胶回收，连接t载体，转化涂板，挑菌测序。挑对的就行了。