今年甲型H1N1流感在美国、墨西哥等国先后爆发。甲型H1N1流感的传播速度非常快，为防治疫情，各国研究小组纷纷进行了甲型H1N1流感病毒的疫苗研制工作。下面为某研究小组的前期研究工

今年甲型H1N1流感在美国、墨西哥等国先后爆发。甲型H1N1流感的传播速度非常快，为防治疫情，各国研究小组纷纷进行了甲型H1N1流感病毒的疫苗研制工作。下面为某研究小组的前期研究工作的简要操作流程图：

（1）实验步骤①所代表的反应过程是 。
（2）实验中常采用PCR扩增得到H基因, PCR过程中使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其主要特点是 。PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？ _ _ 。

（3）步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用的酶是 ，其作用部位为两个核苷酸之间的 键。
（4）构建重组表达载体时，一般需要将H基因与载体结合，常用的载体除质粒外还有
等，在检测受体细胞中是否已经导入目的基因时，常常要借助载体上 的表达。
（5）甲型H1N1流感患者常出现体温升高的症状，人体的体温调节中枢位于 。若某人为甲型H1N1流感疑似患者，在确诊时可从疑似患者体内分离病毒与已知病毒进行
比较。⑴逆转录 ⑵耐高温 B ⑶限制性内切酶和DNA连接酶 磷酸二酯键

(答案→)⑴逆转录 ⑵耐高温 B ⑶限制性内切酶和DNA连接酶 磷酸二酯键 解析：步骤①是以RNA为模板合成DNA的逆转录过程。PCR过程中使用的是耐高温DNA聚合酶（热稳定DNA聚合酶）。A和T之间有2个氢键，C和G之间有3个氢键，所以C和G含量越高，DNA越稳定，也越能耐高温，比较引物A和B可知B对引物稳定性较高，可采用较高的退火温度。构建重组表达载体时，需要用限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，再用DNA连接酶将两者连接形成重组DNA，这两种酶的作用部位都是磷酸二酯键。基因工程的运载体有质粒、动植物病毒和噬菌体，其中质粒是常用的载体。在检测受体细胞中是否已经导入目的基因时，常常要借助载体上标记基因的表达。下丘脑是人体的体温调节中枢。若某人为甲型H1N1流感疑似患者，在确诊时可从疑似患者体内分离病毒与已知病毒进行基因（核酸）的碱基序列比较。

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