有哪些实验用于检测中性粒细胞功能

有哪些实验用于检测中性粒细胞功能

一、细胞运动功能的检测
　　中性粒细胞的运动有随意运动和定向运动之分，可根据其细胞面积判 断中性粒细胞活动的强度。严重酒精中毒及某些肿瘤患者，其中性粒细胞 的随意运动明显减弱，甚至消失。中性粒细胞的定向运动表现为趋化运动， 测定方法大同小异，原理相同。
　　(一)体内试验法(皮肤窗法)
　　染色观察中性粒细胞聚集的开始时间、程度和形态变化。健康人白细 胞在皮窗处 2～3 h 开始聚集，细胞数达 50～100 个，6 小时可达 1 000 个 以上。初期以中性粒细胞为主，以后单核细胞逐渐增多。
　　(二)体外试验法
　　1．滤膜小室法(Boyden 小室法)
　　用油镜检测细胞在透明滤膜内通过的距离，求其趋化单位。
　　2．琼脂糖凝胶平板法
　　将琼脂糖制成凝胶平板，在中央孔加中性粒细胞悬液，两侧孔分别加 趋化因子或对照培养液。经 37℃温育 2～3 小时后，染色测量细胞运动的距 离，按下式计算移动指数。
　　移动指数=趋化移动距离/随意移动距离

　　二、吞噬和杀菌功能的检测
　　(一)细胞内杀菌功能的检测
　　将待检细胞悬液按一定比例混和，加活的白色念珠菌悬液，保温后加 美蓝溶液作活体染色，取样涂片镜检。如胞内白色念珠菌呈蓝色，表示已 被杀死。共计数 100～200 个细胞，按下式分别求其吞噬率和杀菌率。
　　吞噬率(％)=（吞噬细菌的细胞数/计数的细胞数）×100％
　　杀菌率(％)=（胞内含着染菌体的细胞数/计数的细胞数）×100％
　　溶细胞法能更直接反映细胞杀菌情况。将待检中性粒细胞悬液与已经 新鲜人血清调理过的细菌(大肠杆菌或金黄色葡萄球菌)悬液按一定比例混 合，置 37℃，每隔一定时间取定量培养物，经稀释后接种固体平板培养基， 37℃培养 18 小时后，计算菌落数，按下式计算中性粒细胞的杀菌能力。
　　杀菌率(％)=(1—（30、60、90min 的菌落数/0min 菌落数)×100％
　　正常情况下，吞噬指数接近于 1，吞噬率 61％～64％。对大肠杆菌的 杀菌率大于 90％，对金黄色葡萄球菌的杀菌率大于 85％。
　　(二)硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验
　　本法用以检测中性粒细胞的胞内杀菌能力。由于细胞在杀菌过程中耗 能剧增，其耗氧量亦随之相应增加，细胞内磷酸己糖旁路代谢活力增强， 葡萄糖 6-磷酸酶氧化脱氢。此时加入 NBT 可接受所脱的氢，使原呈淡黄色 的 NBT 还原成点状或块状颗粒，并沉积于胞浆内。在显微镜下计数细胞内 有蓝色甲膳颗粒的中性粒细胞所占比例。正常参考值为 5％～10％。
　　(三)化学发光测定法
　　中性粒细胞在吞噬经调理的金黄色葡萄球菌过程中，出现呼吸爆发， 产生大量活性氧自由基（oxygen redicals)，它们与细胞内杀菌作用密切 相关，同时又能产生微弱的发光现象。在反应体系中加_米诺能起增强效应， 使发光效率大为增强，可用化学发光仪测定。

吞噬细胞功能检测的临床应用 试验原理是将人巨噬细胞与鸡红细胞(chicken red blood cell，crbc) 混合后孵育，通过计算巨噬细噬 crbc 百分率和吞噬指数判断人巨噬细胞的 吞噬功能。通过观察 crbc 消化程度，反映巨噬的消化功能。 一、中性粒细胞功能检测的临床意义 趋化能力显著下降见于 chediak-higashi 综合征、lasy 白细胞综合征、 慢性皮肤黏膜白色念珠感染、糖尿病、烧伤等。正常新生儿中性粒细胞趋 化能力亦明显低下。吞噬能力明显低下者见于补或抗体缺陷症时。酶代谢 能力显著降低见于慢性肉芽肿、6 磷酸葡萄糖脱氢酶(g-6-pd)高度缺陷。 nbt 试验不仅是检测中性粒细胞的胞内杀菌能力的试验，还作为疾病的 鉴别指标。正常人外血中性粒细胞 nbt 阳性率约为 10％，全身性细菌性感 染在 nbt 试验阳性率明显增高；病毒性感或无感染的低热患者阳性率一般 在 10％以下。器官移植病人术后因细菌感染伴发热时，nbt 阳性升高；而 因排斥反应发热者，nbt 则正常。故发热患者在暂无条件查清病因或检测报 告较迟时，可用 nbt 试验对发热病因作过筛性鉴别。 二、巨噬细胞功能检测的临床意义 单核巨噬细胞系统具有直接吞噬和杀伤病原体和肿瘤细胞的功能，还 具有参与抗原加工、递呈免疫调节的重要作用，检测巨噬细胞吞噬功能对 于判断巨噬细胞的功能，了解机体的特异性和非特性免疫状态有重要作用。 巨噬细胞吞噬功能低下，主要见于原发和继发的吞噬细胞功能缺陷、 胃癌、肠癌等多种肿瘤病，肿瘤病灶中浸润的巨噬细胞与肿瘤的扩散与转 移呈负相关，检测这两个指标有助于判断机体抗肿的能力。