转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等。下图一是通过生物工程培育能产生人胰岛素烟草的过程。请据图回答：（1）基因工程的核心步骤是（填字母）。此过程所需的

转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等。下图一是通过生物工程培育能产生人胰岛素烟草的过程。请据图回答：

（1）基因工程的核心步骤是 （填字母）。此过程所需的工具酶是
（2）下图二是运载体和反转录得到的胰岛素基因的片段，已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC－，
限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。GeneI和 GeneII为质粒上的标记基因，根据图分析, 应用限制
酶 切割质粒，用限制酶 切割目的基因。构建的重组质粒中,除含有外源基因、标记基
因外,还必须含有 和 。
（3）B过程中，常用 处理使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入。
（4）如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成功，可以采用 方法。（1）A 限制酶和DNA连接酶
（2）I Ⅱ（1分） 启动子 终止子
（3）Ca2+　　（4）抗原-抗体杂交

(答案→)（1）A 限制酶和DNA连接酶（2）I Ⅱ（1分） 启动子 终止子（3）Ca2+　　（4）抗原-抗体杂交 解析：试题分析：（1）基因表达载体的构建是基因工程的核心是目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以传给下一代的关键；目的基因与运载体之间重组需要限制性内切酶将载体切割，再通过DNA连接酶将目的基因与载体之间连接。（2）由图示知限制酶I的识别序列为—G↓GATCC－故只能切割标记性Gene II，限制酶II识别序列为－↓GATC－所以不仅能切割Gene I也能切割Gene II，两个标记性基因在构建表达载体时最少需要保留一个故只能用限制性内切酶I切割质粒；切割目的基因时如果用限制性内切酶I切割只能在图示左端切割右端无法切割因而无法获取含有目的基因的DNA片段，如果用酶II切割不仅能在左端切割也能在右端切割这样就可以获取含目的基因的DNA片段且又能与运载体进行连接，所以切割目的基因时要用酶II。在构建的重组质粒中除了外源基因和标记基因外还需启动子和终止子，启动子位于基因首端是RNA聚合酶识别和结合的位点，终止子位于基因的尾端。（3）为了让重组质粒有利于导入细胞中通常用Ca2+处理细菌使之成为感受态细胞。（4）目的基因导入受体细胞后是否可以稳定维持和表达其遗传特性通常采用分子杂交技术进行检测。用DNA分子杂交技术检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测目的基因是否转录时提取转基因生物的mRNA与基因探针进行杂交观察是否显示杂交带，检测目的基因是否表达成蛋白质是从转基因生物中提取蛋白质用相应抗体进行抗原—抗体杂交观察是否有杂交带出现。考点：本题考查基因工程中目的基因获取、表达载体的构建、重组质料导入、目的基因表达检测等识点，意在考查考生对知识理解能力和读图能力，试题偏中等难度。

好好学习下