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蛋白吸光度为啥都是用450nm?ELISA中检测时也是A450?为啥?

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解决时间 2021-03-24 03:12
蛋白吸光度为啥都是用450nm?ELISA中检测时也是A450?为啥?
最佳答案
提取核蛋白,进行蛋白定量得蛋白浓度
做NFkB的ELISA,450nm处测的吸光度得A450值
最后还要用蛋白含量作为内参统一各样本的蛋白量。ELISA测NFkB的目的是要知道每mg核蛋白含有的NFkB的量,ELISA各样本加样体积一致的,相同体积的蛋白因为蛋白浓度的不同,所以核蛋白含量也不同,这就需要半定量;而NFkB的量与A450值成正比,就是A450/mg protein。
A450/mg protein的标准公式是: A450值/(蛋白浓度×ELISA加样体积)。其实结果是以%正常样本表示的,也可以简化为A450值/蛋白浓度。
最标准的做法是设置标准曲线,求出A450值对应的NFkB的含量,再除以(蛋白浓度×ELISA加样体积),得到的就是每mg核蛋白含有的NFkB的量。仅供参考


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