下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验．实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较

下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验．实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多．将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养．在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖．用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来．材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱．方法步骤：（1）倒平板．分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在______操作．（2）制备土壤稀释液．取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．用无菌吸管吸取上清液lmL，转至9mL的无菌水的大试管中，依次稀释到107倍稀释度．（3）涂布．按照由101～108倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布______个子板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布______个．（4）培养．放入恒温箱内，在28～30℃下培养3～4d．（5）细菌的计数．当菌落数目稳定时，选取茵落数在______的平板进行计数．如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是（稀释度是105倍）______．预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数 （填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目，原因是______．

（1）倒平板应在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染．
（3）按照由101～108倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布3个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板做对照．
（5）当菌落数目稳定时，选取茵落数在30-300的平板进行计数．如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是（稀释度是105倍）5×107，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数多于无氮培养基上的数目，原因是无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存．
故答案为：（1）火焰旁  
（3）3  1  
（5）30～300   5×107   多于   无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存

②不加抗生素④不加氮素⑤加葡萄糖⑧28 ℃--30℃温度下培养 原因是自生固氮菌是异养生物，对抗生素敏感，能固氮，适宜的环境温度为28 ℃--30℃。