做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应?
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解决时间 2021-11-23 01:14
- 提问者网友:记得曾经
- 2021-11-22 02:40
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应?
最佳答案
- 五星知识达人网友:忘川信使
- 2021-11-22 03:33
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应
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这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。
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看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的说下
我们来看看最后一个循环
先95度,dna在高温下变性,解链成单链分子
然后退火,具体温度与所用引物有关,就以55度为例吧。
引物与单链dna模板结合上去
再72度延伸,在taq聚合酶的作用下,引物延伸。
该循环结束。
注意,此时尚有正处于合成过程中的dna链,为了保证充分的得率,所以再增加5分钟,以允许尚处于合成状态的dna分子能够完成整条链的合成。
在rna的逆转录时,也有这样的一个步骤。
用途也是一样的。
不知这下有没有讲清楚?
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这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。
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看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的说下
我们来看看最后一个循环
先95度,dna在高温下变性,解链成单链分子
然后退火,具体温度与所用引物有关,就以55度为例吧。
引物与单链dna模板结合上去
再72度延伸,在taq聚合酶的作用下,引物延伸。
该循环结束。
注意,此时尚有正处于合成过程中的dna链,为了保证充分的得率,所以再增加5分钟,以允许尚处于合成状态的dna分子能够完成整条链的合成。
在rna的逆转录时,也有这样的一个步骤。
用途也是一样的。
不知这下有没有讲清楚?
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- 1楼网友:思契十里
- 2021-11-22 04:21
看vagabonder - 同进士出身 七级说的我就不理解了……
vagabonder说:因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。
如果说taq酶此时正处于复制状态,那延伸时间它在干什么?
更重要的是,如果说taq酶此时正处于复制状态,那循环内可是每次延伸时间完了之后就立刻升温到90度以上进行下一轮循环的变性,而90度以上DNA合成几乎是停止的,照vagabonder的说法,岂不是PCR整个过程30-40次循环都没产物,只有最后一次有产物?
vagabonder说:因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。
如果说taq酶此时正处于复制状态,那延伸时间它在干什么?
更重要的是,如果说taq酶此时正处于复制状态,那循环内可是每次延伸时间完了之后就立刻升温到90度以上进行下一轮循环的变性,而90度以上DNA合成几乎是停止的,照vagabonder的说法,岂不是PCR整个过程30-40次循环都没产物,只有最后一次有产物?
- 2楼网友:轻雾山林
- 2021-11-22 03:42
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