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请教qRT-PCR数据统计问题

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解决时间 2021-03-26 17:41
请教qRT-PCR数据统计问题
最佳答案
这样算:

你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异,就可以计算标准差了。

这么简单的统计分析,用不着SPSS吧, excel就可以解决了。追问谢谢您,可是我还是有点不明白:如果我重复三次,每次3个复孔(即一共9个孔),您指的“把几次试验的对照组的平均值设为1”是指把对照组的ΔCT还是ΔΔCT还是2的-ΔΔCT的平均值设为1啊?谢谢!追答首先,你重复做一个样本(3个重复的孔),那只能算一个值(取平均)。
我说的1是指的相对表达量,不是ΔCT。你得到每个样本中目的基因和内参的CT值后,就可以算出相对表达量了,对不对?

这时,取所有对照组的平均值,设为1. 每次实验的对照组再和这个平均值1比较,就是对照组的标准差了。追问您所说的目的基因和内参的CT值相减得到的不就是ΔCT吗?假设三次实验某一基因的对照组的均值为4,5,6,则均值为5,此时把5设为1,然后再怎么算啊?不好意思麻烦您再解答一下,非常感谢追答按照你说的,5为平均值,那三个组分别和5比较,不就是-1, 0, 1三个值吗。得到的相对表达量就是0.5, 1 和2. 不管是CT值还是表达量,你都可以算出标准差,做出error bar了。追问我知道了,可是这样出来的error bar好大啊,给人感觉误差会很大呀追答这个error bar反应的是真实的差异啊,怎么会给人误差很大的感觉呢,我只是举了个例子,实际上你只要加样量控制的好,对照组的误差都是很小的。不会出现4, 5, 6这样的差异,一般都是在小数点后的差异追问你是用graphpad作图吧?柱状图是选SD还是SEM?无论选哪个误差(0.5,1,2

)都是均值(1)的一半 ,这error bar也太大了吧

追答我都是用excel直接分析作图的,至于error bar有多大,那是实验决定的,和哪个方法作图无关啊。你看我贴在文库里那篇文章的图就知道了,对照组的error bar一般都很小的。如果很大,说你加样误差太大了。

另外,作图的时候,只显示上半截的bar就可以了。来自:求助得到的回答
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老师们好,“你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异,”那么ΔΔCt = ΔCt实验组样品 - ΔCt对照组样品,这里的“ΔCt对照组样品”用的应该是平均值还是单个的测定值,假如测定的是不同部位(根、茎、叶),每个部位都有对照,用的应该是根、茎和叶所有对照的平均值还是其他?
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