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(14分)某研究性学习小组利用荧光素-荧光素酶生物发光法,测定人参愈伤组织中ATP的含量,以研究人参细胞能量代谢的特点。实验原理:荧光素在荧光素酶、ATP等物质参与下,进行反应发出

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解决时间 2021-02-08 00:56
(14分)某研究性学习小组利用荧光素-荧光素酶生物发光法,测定人参愈伤组织中
ATP的含量,以研究人参细胞能量代谢的特点。
实验原理:荧光素在荧光素酶、ATP等物质参与下,进行反应发出荧光;用分光光度计可测定发光强度;当荧光素和荧光素酶都足量时,在一定范围内,ATP的含量与发光强度成正比。
实验步骤:
一、ATP的提取:称取一定量的人参愈伤组织,研磨后沸水浴10min,冷却至室温,离心,取上清液。
二、ATP的测定:吸取一定量的上清液,放入分光光度计反应室内,并注入适量的所需物质,在有氧等适宜条件下进行反应,记录发光强度并计算ATP含量。
请回答:
(1)步骤一中的沸水浴处理,使酶的 被破坏而失活。
(2)步骤二注入的物质中,属于反应物的是 ;分光光度计反应室内能量形式的转换是 。
(3)荧光素酶价格昂贵,为能准确测定出ATP的含量,又能节省酶的用量,学习小组探究了“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”,实验结果如图。

①学习小组配制了1×10-8mol/L ATP标准液、70mg/L荧光素溶液(过量)和溶液进行实验。
②结果表明:图中 点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。e、f、g点所对应的荧光素酶浓度不同,但发光强度相同,这是因为 。
(4)ATP测定对食品卫生监控有重要意义。食品卫生检验人员利用上述生物发光法测定某熟食品样品中细菌的ATP总含量,测算出了细菌的数量,从而判断食品污染程度。做出上述判断的理由是:每个细菌细胞中ATP的含量 。空间结构 (2)荧光素 化学能转换为光能(和热能)(3)①浓度分别为0、10、20、30、40、50、60mg/L荧光素酶②e ATP全部水解(或ATP数量限制) (4)大致相同(且相对稳定)
最佳答案
(答案→)空间结构 (2)荧光素 化学能转换为光能(和热能)(3)①浓度分别为0、10、20、30、40、50、60mg/L荧光素酶②e ATP全部水解(或ATP数量限制) (4)大致相同(且相对稳定) 解析:(1)沸水浴会破坏酶的空间结构,酶的活性丧失。(2)由实验原理可知,反应物为荧光素;利用ATP使荧光素发出荧光,使ATP中的化学能转变为荧光的光能。(3)①由题意,还需要配置荧光素酶,由上图可知,横坐标为浓度梯度应分别为0、10、20、30、40、50、60mg/L。②发光强度刚达到最强的点对应的浓度是荧光素酶最佳浓度,为e点;ATP数量一定,当酶浓度超过最佳浓度后,由于ATP数量有限,发光强度将维持一定强度不再变化。(4)ATP与ADP的含量在人体内处于动态平衡,同种生物体内ATP很少,含量相对稳定。
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