microRNA的茎环引物及其PCR扩增的上游引物怎么设计？
答案:1 悬赏:80 手机版
解决时间 2021-04-04 10:09
- 提问者网友：沉默菋噵
- 2021-04-04 06:27
microRNA的茎环引物及其PCR扩增的上游引物怎么设计？
最佳答案
- 五星知识达人网友：孤独的牧羊人
- 2021-04-04 07:39
合成的单链在实验时又一个和模板结合的退火过程，在这个过程中会自动形成茎环结构，如果你的茎环结构设计合理的话。
我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基，上面有说明的，是为了调整Tm值。
上游引物不能全覆盖miRNA，5‘-增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应，可以再用软件检查，避免非特异性结合
一般自己设计这种miRNA的RT-PCR引物需要不断优化，一次成功的机会较小，要做好心理准备。可以选择试剂盒
我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基，上面有说明的，是为了调整Tm值。
上游引物不能全覆盖miRNA，5‘-增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应，可以再用软件检查，避免非特异性结合
一般自己设计这种miRNA的RT-PCR引物需要不断优化，一次成功的机会较小，要做好心理准备。可以选择试剂盒
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