用什么实验方法测定土壤微生物各组分含量

用什么实验方法测定土壤微生物各组分含量

为研究土壤中细菌、真菌、放线菌的数目，我们利用选择培养基，以便在土壤水溶液中选出目的菌种，在用分浓度梯度法在选择培养基上培养出但菌落，以便计数。计数时可以根据不同菌种的不同形态学特征来分辨，如果出现与上述三种以外特性的菌种可以用革兰氏染色鉴别。
一、主要的实验药品与仪器
（1）实验药品:牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl, 可溶性淀粉 ， KNO3 , K2HPO4, MgSO4 ，FeSO4，KH2PO4，葡萄糖
（2）实验仪器:试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
二、实验方法
1、细菌分离：取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡10min，制成10-2 土壤稀释液，再取0.5ml 10-2 土壤稀释液加入4.5ml无菌水中，制成10-3 土壤稀释液，以此类推··· ···。取10-5 ，10-6 ，10-7 土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。在30度恒温培养箱中培养24h后观察结果。
2、放线菌分离：取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡5min，制成10-2 土壤稀释液，再取0.5ml 10-2 土壤稀释液加入4.5ml无菌水中，制成10-3 土壤稀释液，以此类推··· ···。取10-3 ，10-4 ，10-5 土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。在28度恒温培养箱中培养5~7d后观察结果。
3、霉菌分离：取土样5g，加入95ml无菌水中，震荡5min，制成10-2 土壤稀释液，再取0.5ml 10-2 土壤稀释液加入4.5ml无菌水中，制成10-3 土壤稀释液，以此类推··· ···。将以灭菌的培养基融化，加入链霉素溶液，但培养基凝固后，取10-2 ，10-3 ，10-4 土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。在28度恒温培养箱中培养3~5d后观察结果。
三、结果与讨论 当培养结束后，观察培养基上的菌落，由于本次试验的各种经济，效果，作用等等方面的原因，培养基并不能完全分离土壤中的各种菌类，例如，土壤中除了细菌，霉菌，放线菌外还有大量的杂菌，如：酵母菌、真菌、藻类等，微生物，如：各种寄生虫（卵）等，所以我们要根据细菌，放线菌，霉菌的宏观物理特性来分别。当进行显微观察时，霉菌不用染色，放线菌、细菌要进行简单的染色，然后再显微镜下观察菌体形态。