（10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题

（10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
反应条件

温度
时间
变 性
95℃
30s
复 性
55℃
30s
延 伸
72℃
1min
30个循环后
适宜
5-10min
保 温
4℃
2h

PCR反应体系
50ul
缓冲液
5ul
脱氧核苷酸
1ul
引物A
0.5ul
引物B
0.5ul
DNA聚合酶
0.5U
模板DNA
1-2ul
加去离子水补足至50 ul
①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是 。
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有 的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是 。

(答案→) 解析：⑴圆褐固氮菌是自生固氮菌能够自主固氮，酵母菌不能自主固氮，可利用这一特点，分离圆褐固氮菌和酵母菌，又圆褐固氮菌是原核生物是细菌，酵母菌是真核生物，可利用青霉素能杀菌，对真核细胞生长无影响，来分离圆褐固氮菌和酵母菌。⑵PCR技术扩增DNA时，不需要ATP提供能量，由于DNA变性需要95度的高温，所以DNA聚合酶要耐高温，DNA聚合酶延伸DNA链时只能从3′端。

我明天再问问老师，叫他解释下这个问题