已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何扩增已知基因的启动子？能否详细一点介绍一下，谢谢！

已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何扩增已知基因的启动子？能否详细一点介绍一下，谢谢！

可采用启动子探针载体，该载体的筛选基因上游缺乏启动子。现将你已知基因ORF上游的片段扩增出来，插入启动子探针载体筛选基因的上游，转化宿主菌后观察筛选基因是否表达，如果表达则说明插入片段有启动子活性，再逐渐减少插入的片段逐步找出活性中心。其实咋获得已知基因ORF上游序列后，可先用启动子分析软件分析一下，这样做起来能简单些。

同一生物体中，有些基因的启动子是相同的，有些是不同的(比如，组织特异表达基因，启动子具有组织特异性，导致某些基因只在某些特定的组织中表达)。

RACE技术，可以去百度百科一下

因为是已知的片段扩增，所以只要设计好扩增该片段的一对正反引物即可，引物的设计可以在"Nature"上查查，引物的合成可以交由一引物合成公司提供的。后期可以做个凝胶电泳或者条件好的话，做个荧光PCR，分析分析就OK了。