（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切

（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：

（l）基因工程的核心是 。
(2)构建基因表达载体时，可用一种或多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用　 酶，分别对目的基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为　 种和　 种。
（3）要筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应首先选择含　 的培养基中筛选番茄组织细胞。
（4）研究人员通常采用　 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.
(5)基因工程操作中的第四步是目的基因的检测与鉴定,在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用　 技术，。采用　 方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达。
(6)图中③④分别指的是　 、　 ,欲获得人工种子应培养到　 阶段。将II细胞培养成完整植物体所用技术的理论基础是　 。

(答案→) 解析：（1）基因表达载体的构建是基因工程的核心。、（2）为了防止黏性末端任意拼接，应选择双酶切，该实例应选用PstI和SmaI酶，分别对目的基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为4种和2种。（3）质粒上的标记基因是抗氨苄青霉素基因，可选择含氨苄青霉素的培养基中筛选番茄组织细胞。（4）将目的基因导入植物细胞的方法是农杆菌转化法或基因枪法。（5）检测目的基因是否翻译通常采用抗原－抗体杂交技术，采用低温培养方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达。（6）图中③④分别指脱分化和再分化；欲获得人工种子应培养到胚状体阶段，植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性。

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