急求一个微生物学的实验方案（除草剂二氧喹啉酸的降解微生物筛选）

（三）整体流程：

1. 土样的制备：

将采集的土样经风干、粉碎成2mm大小颗粒，采用四分法分别取土壤样品各lkg，于4

℃冷藏保存备用。

2. 培养基的制备：

2.1液体无机盐MM培养基的制备

以二氯喹啉酸为唯一C源培养基的制备：

MgS0₄·7H₂0 0.1g； CaCl₂·H₂0 0.02g； KH₂P0₄ 0.68g； K₂HP0₄ 1.73g； MnS0₄·H20 0.03g；NH₄N0₃ 1.0g； FeS0₄·7H₂0 0.03g；蒸馏水1L，用NaOH和HCl调pH为7．0。

以二氯喹啉酸为唯一N源培养基的制备：

MgS0₄·7H₂0 0.2g； CaCl₂·H₂0 0.1g； KH₂P0₄ 0.5g； K₂HP0₄ 0.5g； NaCl 0.2g； 葡萄糖 5g；蒸馏水 1L，用NaOH和HCl调节pH为7．0。

2.2 固体培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)的制备：

牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂粉15g，无菌水1L。

3. 降解菌的培养

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选用自然筛选：从含有二氧喹啉酸的土壤中选取样品，控制培养基成分初筛复筛

制作悬浮液，稀释，涂平板，挑选菌落，性能测定。

通过测定培养基二氧喹啉酸的含量，选择出培养皿。培养基应易于测定二氧喹啉酸，通过易测的现象。

选出来后富集培养。

样品采集-------样品处理-------目标菌富集培养------菌种初筛-------复筛------性能测定---------菌种保藏

样品预处理：分离前对含微生物的样品进行处理，以提高分离效率。

物理法：热处理；膜过滤；离心--------浓缩样品中的微生物

化学法：增加特定物质，增加目标菌的数量

诱饵法：将固体如石蜡，花粉等加到样品中做成诱饵，以富集目标菌，待其产生菌落后在进行分离

富集培养：将样品中的目标菌转化成优势种

控制培养基成分

控制培养条件，（选择压力），如加二氧喹啉酸

菌种分离：平板划线

稀释分离

涂布分离

毛细管分离

小液滴分离

初筛：初筛得能够把合成或产量较高的目标菌筛选出来

复筛：在初筛的基础上进行摇瓶培养，精确测定其降解除草剂的能力

菌种的测定：测出这是什么菌种

菌种的保藏