求RNAi技术和TALEN技术的优缺点

求RNAi技术和TALEN技术的优缺点

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象。这种现象是生物为保护自身基因组免受外源性(如病毒)和内源性(如转座元件)序列的侵袭,而特异性地调节或干扰基因表达的一种自身防御“免疫”应答现象。RNAi系统具有稳定转座子、清除异常RNA、调节基因表达等功能,且RNAi沉默基因的高效率、高特异性以及能在细胞内进行人工诱导,使RNAi作为一种反向遗传技术广泛应用于基因功能的研究,利用RNAi技术研究生物的基因功能已成为生物技术领域的有力手段(Plasterk,1998)。

TALEN (transcription activator-like (TAL) effector nucleases)靶向基因敲除技术是一种崭新的分子生物学工具，现已应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类研究对象。研究发现，Xanthomonas TAL蛋白核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有较恒定的对应关系。研究者们利用来自Xanthomonas TAL的序列模块，构建针对任意核酸靶序列的重组核酸酶，在特异的位点打断目标基因，敲除该基因功能。成功解决了常规的ZFN方法不能识别任意目标基因序列，以及识别序列经常受上下游序列影响识别特性的问题，使基因敲除变得简单方便。不再是您实验中的障碍。

其实TALEN很好，很新，比慢病毒还要好，而慢病毒比RNAi好。
shRNA可以在干细胞，神经细胞，胚胎干细胞等难转染的细胞中高效率的蛋白，他的启动子等都是外源的，表达蛋白的翻译后修饰可能会不够真实，而TALEN可以更好的弥补他的缺陷。第一，TALE靶点识别模块构建。TAL的核酸识别单位为重复34个恒定氨基酸序列，其中的12、13位点双连氨基酸与A、G、C、T有恒定的对应关系，即NG识别T，HD识别 C，NI识别A，NN识别G。为获得识别某一特定核酸序列的TALE，只须按照DNA序列将相应TAL单元串联克隆即可。由于物种基因组大小的不同，选择的特异序列长度也不同，对于哺乳类动物包括人类，一般选取16-20bp的DNA序列作为识别靶点。第二，
TALEN的基因敲除
将识别特异DNA序列的TALE与内切核酸酶FokI偶联,可构建成剪切特异DNA序列的内切酶TALEN。而且FokI需形成2聚体方能发挥活性，大大减少了随意剪切的几率。在实际操作中，需在目标基因的编码区或外显子和内显子的交界处选择两处相邻（间隔13-22碱基）的靶序列（一般16-20个碱基）分别进行TAL识别模块构建。将这两个相邻靶点识别模块（分别）融合克隆到FokI的N-末端，形成真核表达载体，得到TALEN质粒对。
将TALEN质粒对共转入细胞中可实现靶基因敲除。TALEN质粒对共转入细胞后，表达的融合蛋白，分别与靶位点特异结合，由于两个TALEN融合蛋白中的FokI临近， 形成二 聚体，发挥非特异性内切酶活性，在两个靶位点之间剪切DNA，形成DSB（Double-Strand Breaks）,诱发DNA损伤修复机制。细胞可以通过NHEJ（Non-homologous End Joining）修复DNA，在此修过程中或多或少地删除或插入了一定数目的碱基，造成移码，形成目标基因敲除突变体
TALEA的转录激活
将识别特异DNA序列的TALE与转录因子激活区域VP64(VP64 Activation Domain )融合，可构建成识别启动子上特异DNA序列的转录激活因子TALEA. 在实际操作中，需在目标基因的启动子上游选取靶序列（一般12-18个碱基），构建TAL识别模块。将识别模块TALE融合克隆到VP64的N-末端，形成真核表达质粒TALEA。将TALEN质粒转入细胞中，表达的融合蛋白结合启动子附近的特异DNA序列，并通过VP64激活区域与Pol II 结合，从而激活基因的转录，提高了内源目标基因的表达。

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象。这种现象是生物为保护自身基因组免受外源性(如病毒)和内源性(如转座元件)序列的侵袭,而特异性地调节或干扰基因表达的一种自身防御“免疫”应答现象。RNAi系统具有稳定转座子、清除异常RNA、调节基因表达等功能,且RNAi沉默基因的高效率、高特异性以及能在细胞内进行人工诱导,使RNAi作为一种反向遗传技术广泛应用于基因功能的研究,利用RNAi技术研究生物的基因功能已成为生物技术领域的有力手段(Plasterk,1998)。本文简要介绍近年来RNAi技术在导入方式、昆虫基因功能研究及害虫防治中的应用等方面取得的最新研究成果。1昆虫RNAi的导入方法目前对昆虫进行RNAi的操作技术已经比较成熟,将dsRNA或siRNA导入昆虫体内主要有3种方法,即注射、饲喂和组织培养。每种方法都各有其优缺点,因而根据用途选择最佳方式是有必要的。追问谢谢，TALEN技术呢？据说他是一个新技术，能比较下他们的优略势，如果能和ZFN一起比较的话就更加感谢了。追答暂时还不怎么会解说，忘见谅。

RNAi技术瞬时转染是临时性的干扰目的基因的表达，而稳转存在干扰序列随机整合到基因组，整合的位置对细胞的影响不确定，且对照较难控制。talen技术是靶向定位敲出，特异性高，可以针对某个基因进行敲出，不会对基因组的其他位置产生影响。