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我要扩增某个物种中的一个酶的基因,该如何设计实验?怎么获得在某个物种中该酶的基因,谢谢!

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解决时间 2021-11-21 06:35
我要扩增某个物种中的一个酶的基因,该如何设计实验?怎么获得在某个物种中该酶的基因,谢谢!
最佳答案
1.目的菌株的这个酶的基因是不知道,我是查的其他物种的该酶的基因,是根据我查的酶的基因直接设计引物吗?这个的话可以根据其他物种设计兼并引物,要是嫌费事可以利用和他关系最近的物种设计引物,一般都可以扩出来
2.是做菌落PCR呢,还是做像你所说的先提取该物种的RNA,然后再通过RT-PCR的方法扩增?

要先提取该物种的RNA,然后再通过RT-PCR的方法扩增,然后再涉及到菌落pcr追问谢谢你^-^我下来试试
全部回答
1. 在GeneBank等数据库中查到该酶的cDNA序列
2. 从编码区的起始密码子atg开始设计正向引物,终止密码子tga/taa/tag处设计反向引物(具体设计方法...就不多说了...21bp左右)
3. 收集该物种的RNA,通过RT PCR的方法得到cDNA
4. PCR的方法将目的基因P出来即可追问目的菌株的这个酶的基因是不知道,我是查的其他物种的该酶的基因,是根据我查的酶的基因直接设计引物吗?
是做菌落PCR呢,还是做像你所说的先提取该物种的RNA,然后再通过RT-PCR的方法扩增?

谢谢^-^
通过另一个物种的酶的氨基酸序列比对,找出在目的物种中与其最同源的序列,然后对该序列进行扩增,通过后续实验进行验证。
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