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荧光定量PCR 标准曲线的制作 是不是可以软件自动生成的!

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解决时间 2021-04-24 09:51
荧光定量PCR 标准曲线的制作 是不是可以软件自动生成的!
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是的啊!但是你要在一起上标注好哪个是标样以及重复,他就自动生成了
再问: 谢谢 请问具体怎样设置最后才会自动出现标准曲线啊???
再答: 每个机器不一样 我用的是biorad的,然后P上之前有一个面板显示96孔,你自己找找,一般在设置里面,然后选中所有做标样的孔,有一个选项,unknown,standard什么的,默认为unknown。然后你把它改成standard,选横方向(意思就是浓度梯度横向递增,竖排是重复),就行了。 这个问题...前几天技术员来的时候我还专门问过呢,她的解释是绝对定量因为要求很高,所以当时给客户考虑的是每次实验都要做一次标准曲线(是每次PCR)。然后我问要是我觉得这次标准曲线ok,样品不好重跑一次能不能把上次protocol的标准曲线调出来直接设,她说所有的realtime的机器都没有这样的设置。就是说你每一次PCR都要跑一次标样! 我个人觉得不用,只要每个样品有一个标准曲线就行了,剩下的把第一次的标准曲线调出来用就ok。 标准曲线是包括你的样和actin的啊,不知道你说的所有的样一个标准曲线怎么用? 共用actin 的标准曲线? 建议你的标样的模版DNA和actin都连在质粒上,从质粒扩标准曲线而不是回收产物,这样好一点


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