质粒能成功转入植物细胞，并将质粒上的一部分外源DNA整合到植物的DNA中。下图表示利用质粒进行转化获得的过程。请据图分析回答：（1）④过程应用的主要生物技术是，该技术的理论依据是　

质粒能成功转入植物细胞，并将质粒上的一部分外源DNA整合到植物的DNA中。 下图表示利用质粒进行转化获得的过程。请据图分析回答：

（1）④过程应用的主要生物技术是 ，该技术的理论依据是　 。关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行　 和　 。
（2）过程②需要通过　 使质粒与目的基因切口黏合。
（3）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图分析：

①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入　 。
②人工改造时用限制酶II处理，其目的是：第一，去除质粒上的　 （基因），保证T—DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于　 。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。
③若用限制酶I分别切割改造过的理想质粒和带有抗除草剂基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是　 。
（4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为序列，则该酶识别的核苷酸序列是　 。
（5）过程③可以采用的方法是　 。
（6）为了检测通过④过程获得的幼苗是否具有抗除草剂的特性，可采用的方法是　 。

(答案→) 解析：本题考查了基因工程和植物细胞工程的相关知识。（1——2）第一个图表示的是抗除草剂大豆的形成过程，其中①表示质粒的获取和切割；②是用DNA连接酶连接目的基因和质粒，获得重组质粒；③受体细胞；④表示将受体细胞进行植物组织培养，这一技术利用了植物细胞的全能性，包括2个关键步骤，即利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行脱分化和再分化。（3）①作为基因工程载体的质粒应该包含：复制原点、限制酶的切割位点、标记基因、启动子和终止子。图中的Ti质粒缺少启动子，所以要使抗虫基因表达，还应插入启动子。②若用限制酶II处理该质粒，可去除质粒上的tms基因和tmr基因，这样可以保证T—DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；用限制酶II处理后，该质粒只保留了一个限制酶作用位点，这样有利于目的基因的准确插入。③用限制酶I分别切割改造过的理想质粒，破环了Ti质粒上的四环素抗性基因，但没有破环卡那霉素抗性基因，所以分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到现象是在含有卡那霉素的培养基上能够生长，而在含四环素的培养基上不能生长。（4）限制酶识别的核苷酸序列一般是回文序列，所以由黏性末端序列可知该酶识别的核苷酸序列是。（5）过程③表示将目的基因导入受体细胞，若受体细胞是植物细胞，可以采用的方法有花粉管通道法、农杆菌转化法、基因枪法。（6）对幼苗喷施除草剂，再观察其生长情况，可从个体水平上检测幼苗是否具有抗除草剂的特性。

收益了