对PCR产物测序需要怎么准备样品

对PCR产物测序需要怎么准备样品

对PCR产物测序需要怎么准备样品
把目的片段连接到T载体上，然后转化到感受态细胞中培养，鉴定阳性菌落，培养转化好菌落，将提取质粒再做一下鉴定（酶切或PCR）。把阳性的质粒或菌液寄给测序公司就ok了。

pcr 产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带，实际上有多个分子。也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带。如果只是进行pcr产物回收，没有进行凝胶分离的过程的话，东西可能更多了。问题就在于，如果出现双峰或者多峰，这个样品就白送了，什么也结果也没有。 特别你现在用的还是简并引物，本身目标就是为了能扩增出目标片段来，比较建议先做ta克隆，然后测序的时候，最好挑几个克隆去测，不要只送一个克隆。现在测序也不贵，这样一次测上几个克隆，也可以确认在扩增出来的片段中，是否只有一个分子，还是其实有多个不同序列的片段。 另外，长度选择的问题，既然设计了简并引物，就是要钓取目前序列还未知的基因，可以选择从长片段开始测序，根据这个结果再考虑短的片段是否需要再继续测序。只有拿到目标序列了，才能决定下一步采用什么方式来获得全长的基因片段。