如何测RNA浓度

如何测RNA浓度

我觉得还行吧,我做RT-PCR也是提取了RNA之后测一下浓度就好了,不跑胶.后面的PCR也能做出来.

一般通过总量，纯度与完整性三大项检测来确认rna质量： 1总量：微量分光光度计测260nm吸收值计算。 2纯度：微量分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值，用于评估有机溶剂残留；260nm/280nm吸收值的比值，用于评估蛋白质污染比例。 3完整性：以agilent bioanalyzer进行毛细管电泳(capillary electrophoresis)，并以软件的rin(rna integrity number)分数评估，10为rna完整性最好，0为最差。 rna质检参数中260、280、320、230nm下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值。其中： a230: 测定其它碳源物质，如酚，糖类等。 a260：核酸的吸收峰测，测rna，dna，引物等的浓度用的。 a280：蛋白质的吸收峰。 一般的，我们只看od260/od280(ratio，r)在1.8~2.1范围内时，我们认为 rna中蛋白的污染是可以容忍的，不过要注意，当用 tris 作为缓冲液检测吸光度时，r 值可能会大于 2（一般应该是<2.2的）。当r 1.8时，溶液中蛋白的污染比较明显，可以根据自己的需要决定这份rna 的命运。当r > 2.2时，说明rna已经水解成单核酸了，而纯rna的od260/od280的比值为2.0。