重组荧光素酶表达载体 为什么 p

重组荧光素酶表达载体 为什么 p

只能先就标题的问题谈谈我的认识。后面的追问我了解得也不全面。

1。两者的结果检测方法不同。GFP绿色荧光蛋白，很直观，能够直接检到荧光，在普通的细胞培养条件下都能够观察到，对细胞的生命活动和其他并行的实验安排影响很小。荧光素酶报告基因使用起来比GFP多一个步骤，因为荧光素酶是个酶，不发荧光，发荧光的是它的底物，荧光素。荧光素在细胞里（要说萤火虫细胞我就不知道了哦）是没有的。 所以检测荧光素酶的通常步骤是裂解细胞，释放荧光素酶，与荧光素及其他所需化学物质混合，才得到荧光。现在虽然也有活细胞内检测荧光素酶的手段，但要将荧光素送入活细胞，本身就已要对细胞进行相当的干扰。所以一般来说荧光素酶实验的同一批细胞不适合再做其他并行实验。

2。两者的结果含义不同。GFP如果说是定量检测表达蛋白的话，这个定量只能够指，表达的细胞是多少个，不表达的细胞是多少个。GFP对于单个细胞来说，就有阳性和阴性两种结果罢了。GFP不能够定量地告诉你，这个/群细胞里的表达量是多高还是多低。荧光素酶就能够定量地得到表达量/表达水平的数值，但这个数值是相对于一群细胞来说，而不是对于单个细胞。所以荧光素酶常常用来研究启动子的功能与调控，因为启动子对基因表达的调控可以是渐变的，而不是简单的开和关两种状态。