直接跑pcr和加上克隆载体的区别
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解决时间 2021-02-28 10:48
- 提问者网友：末路
- 2021-02-27 19:50
直接跑pcr和加上克隆载体的区别
最佳答案
- 五星知识达人网友：空山清雨
- 2021-02-27 20:48
直接跑pcr和加上克隆载体的区别
1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A（一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min）,然后和普通PCR产物一样进行TA克隆；
2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适（一般3-8:1）
1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A（一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min）,然后和普通PCR产物一样进行TA克隆；
2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适（一般3-8:1）
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