请教纯化培养少突胶质细胞方法

请教纯化培养少突胶质细胞方法

不可能从形态上完全区分出神经元和胶质细胞,但在相差显微镜下,可看到胶质细胞贴壁较神经元好,细胞直径较神经元稍小,另外一个很明显的特征是神经元不会增殖,而胶质细胞会快速增殖的. 最好的鉴定方法是做免疫组化NSE染色,胶质细胞不会着色.
在银浸染标本中，少突胶质细胞比星状胶质细胞小，其突起也较小而少，呈珠状，故被称之为少突胶质细胞或寡突胶质细胞。但是用特异性免疫细胞化学染色显示的少突胶质细胞，其突起并不少，而且还有许多分支。

博凌科为生物科技-为你解答：新生1-2天wistar大鼠乳鼠，经75%酒精消毒，断头处死，取脑放入冷的d-hanks平衡盐溶液，去除脑膜及大血管。分离两侧大脑皮质并剪成1mm 3 大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空气浴震荡消化10 min，用含10% fbs的dmem培养基终止消化，离心1000rpm 10min，去上清，再用含10% fbs的dmem培养基重悬沉淀.经75m筛网过滤，收集滤液，离心1000rpm 10min，收集沉淀用含10% fbs的dmem培养基重悬，调整细胞密度至1.5106/ml，种植于75cm 2 培养瓶，经1小时差速黏附去除成纤维细胞后，将细胞悬液转移到一新的75cm2培养瓶继续培养，两天换液一次。7天后将培养瓶放入水平摇床，260rpms 2小时 37℃,换液弃除小胶质细胞，放入培养箱平衡1小时，重新置于水平摇床，260rpms 18小时37℃，换液弃除少突胶质细胞，用新鲜培养基洗2遍，加入0.25%胰蛋白酶与0.02% edta1：1混合液消化、传代备用。