科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄细胞的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄细胞的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图回答问题。

(1)在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用 , 限制酶，分别对 , 进行切割。
(2)培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体中含有 ，作为标记基因。
(3)研究人员通常采用农杆菌转化法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
(4)利用组织培养技术将导入鱼抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的 , 过程。8分
(1)含PstⅠ SmaⅠ　 鱼抗冻蛋白基因的DNA、 质粒
(2)抗氨苄青霉素基因(ampr)　
(3)抗原—抗体杂交
(4)脱分化、 再分化

(答案→)8分 (1)含PstⅠ SmaⅠ　 鱼抗冻蛋白基因的DNA、 质粒(2)抗氨苄青霉素基因(ampr)　(3)抗原—抗体杂交(4)脱分化、 再分化 解析：试题分析：(1)在此实例中，应该选用PstⅠ, SmaⅠ限制酶，分别对鱼抗冻蛋白基因的DNA, 质粒进行切割。切割下来的鱼抗冻蛋白基因左侧是SmaI的切口，右侧是PstI的切口，粘性末端不同，这样切出的目的基因（鱼抗冻蛋白基因）不会发生自生环化现象，质粒的处理同上。(2)培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体中含有抗氨苄青霉素基因(ampr)，作为标记基因。(3)通常采用农杆菌转化法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内,采用抗原—抗体杂交技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。(4)利用组织培养技术将导入鱼抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株,体现植物细胞的全能性。图中③、④依次表示脱分化、再分化。考点：基因工程。点评：本题相对综合，可以通过理解记忆的方法平时加以训练。

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