如何将目的基因整合到细菌染色体中去
答案:1 悬赏:10 手机版
解决时间 2021-03-09 18:37
- 提问者网友:活着好累
- 2021-03-09 09:03
如何将目的基因整合到细菌染色体中去
最佳答案
- 五星知识达人网友:刀戟声无边
- 2021-03-09 09:36
利用DNA同源重组的特性进行整合,具体解释请自己百度一下。
一般方法和步骤:
确定目的基因需要整合到基因组上的位置;
设计整合片段:目的基因两端连接与基因组上目的基因的位置两端的序列同源,这两个片段分别称之为上、下同源臂,长度一般在70bp至200之间,上下同源臂之间一般除了目的基因还要带上筛选标记基因,同源臂之间(包括同源臂)这一段序列称为插入片段;
插入片段可以直接电转化或者显微注射转化筛选,一般需要多次实验才能成功,而且大部分细菌暂时无法电转化和显微注射;
不能直接转化的,插入片段需要构建到载体质粒上(在大肠杆菌上完成),载体要带有自杀原件或者负筛选标记,再转化到目的菌株筛选。
具体技术过程,可以查找微生物同源重组、基因组整合这些文献参考。
一般方法和步骤:
确定目的基因需要整合到基因组上的位置;
设计整合片段:目的基因两端连接与基因组上目的基因的位置两端的序列同源,这两个片段分别称之为上、下同源臂,长度一般在70bp至200之间,上下同源臂之间一般除了目的基因还要带上筛选标记基因,同源臂之间(包括同源臂)这一段序列称为插入片段;
插入片段可以直接电转化或者显微注射转化筛选,一般需要多次实验才能成功,而且大部分细菌暂时无法电转化和显微注射;
不能直接转化的,插入片段需要构建到载体质粒上(在大肠杆菌上完成),载体要带有自杀原件或者负筛选标记,再转化到目的菌株筛选。
具体技术过程,可以查找微生物同源重组、基因组整合这些文献参考。
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