您现在知道如何在引物中加酶切位点么？我还是不太明白

您现在知道如何在引物中加酶切位点么？我还是不太明白

设计好引物后，分别在上下游引物的5’端加上你所需要引入的酶切位点就可以了。如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话还有酶切、连接、验证。

直接在设计好的引物前面加酶切位点，然后再在前面加几个保护碱基，一般4个左右，只要退火温度在60左右即可追问加下Q435632866

比如引物设计好了有16个碱基，你又需要加入酶切位点，那么就在引物左端加上相应的碱基即可，等扩增完成后，即出现酶切位点。酶切后即可用于连接。