做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因

做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因

你说的应该是real time PCR吧，注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写，和real time一定要分开来。
常说的qPCR，qRT-PCR，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢，由于之前RNA提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。
比方说，A基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a b样品存在RNA质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。
这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15。由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，A基因的在ab样品之间的-ΔΔct值是1，也就是表达量为2倍的关系。
这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例，常用的内参有actin gapdh hprt等等。
当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组DNA做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。
你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上数据库搜就可以了。
原创内容，码字不易，万望采纳。

做任何实验都是需要对照的，内参就是一个阳性对照，如果连阳性对照都没有扩出来，说明模版是有问题的，那么你的目的基因肯定是扩不出来的。常用的管家基因就三种：GAPDH、ACTIN、18S RNA。